——合成DNA寡核苷酸所需的短的单链DNA/RNA片段，有专门设计以适配目标 DNA区域的侧翼。它们为DNA合成提供了起点。通常要两个引物，分别用于目标区域的两侧；
——荧光标记的寡核苷酸结合每个引物的下游区域。通常要两种不同的探针，当它们都连接到特定的
、其他赋形剂，如MgCl2辅因子、pH缓冲液、甘露醇、海藻糖、BSA、PEG2000等；
DNA（来自病毒、细菌等）；或者从被测样品中进行提取（如果可行的话）；II.
96孔板或“鸡尾酒”离心管中做准确组合。这些组分都需要冷藏，并且保质期也相对较短，同时交叉污染会是一个大问题。更糟糕的是，工作台移液错误也会造成麻烦。
过程需要特定的热循环重复加热/冷却反应试管30-40个循环，以实现DNA的扩增过程。扩增仪也应该有一个荧光计来监测扩增的目标DNA。其他的还有一些更新的扩增方法，例如环介导
和重组酶聚合酶扩增(RPA)，这一些方法是等温过程，不需要热循环和使用特殊设备。
芯片上。以更少量的试剂和更低热量有望实现更快和更精确的温度循环，由此产生更快的结果。
过程的一个重要流程，大多数都用在单个试剂和*产品检验测试试剂盒的生产。研究表明，PCR扩增效率通常不会由于单个试剂或PCR诊断试剂盒使用了冻干而受影响。虽然冻干可能会使探针的荧光强度略有下降，但并不影响整个测量过程。冻干
产品追求1-3%的*水分含量。建议通过Karl-Fisher滴定法测量水分。冻干
试剂和诊断试剂盒具有很强的吸湿性。从冻干机中取出产品时，必须小心避免暴露在环境湿气中。湿度受控的房间或隔离设备可用于减缓水分的再吸收。对于产品的储存和运输，试剂必须密封在防潮容器中，例如铝袋。冷冻的聚合酶和逆转录酶可能含有高达
的甘油作为冷冻保护剂和稳定剂。甘油不利于冻干，因为它会干扰水分的去除，进而影响产品的稳定性和结构。因此冻干时要注意首选不含甘油的试剂。
试剂中的总水分含量非常小。冷冻干燥机设计不需要具有1:1的搁板表面与冰冷凝器表面积比，因为这大多数都用在高水分、散装液体或西林瓶应用。当产品样本大小在微升范围内时，是很难使用产品探针的。因此在工艺开发时，皮拉尼
电容压力计压力差比较法是更为推荐的干燥终点工具。如果冻干机配备隔离阀且可以在一定程度上完成自动开启和关闭，也能够正常的使用压力升法来测试。另外，冻干机中的制冷系统也应考虑*优化（与常识保留冗余的设计理念相反），较小的压缩机可以大幅度减少室内热量的消耗。这在某种程度上预示着对于电压和能源占用较小。风冷的中试型冻干机型号更适用于中等批量的诊断试剂的生产和研发，这避免了对冷却水设施的需求，因为冷却水设施对于大部分
诊断试剂盒的明显优势是消除了试剂盒冷藏运输和储存的冷链依赖，延长了其可用保质期。96
PCR诊断试剂盒的标准配置。相比较手动进样这种繁琐的操作，使用自动化液体灌装设备，除了更快的装载时间和更高的吞吐量外，它还提供更好的过程控制和可重复性。在批量装载到冻干机的过程中，控制产品的蒸发和产品温度会是一个问题，特别是对于具有较大批量的较大装置，完全装载需要比较长的时间。对搁板进行预冷上会降低以上问题带来的影响。如果加载到芯片或微流体通道上，那么蒸发和传热又会是一个大问题。
孔是塑料管，底部与冷冻干燥机搁板接触的表面积很小。在冷冻干燥过程中能够正常的使用铝制冷却块来增加传导热传递。
对流传热在冻干中也很重要，因为它能够在一定程度上帮助产品在货架上更均匀地分配热量，减轻由辐射传热差异引起的边缘效应。在产品支持的前提下，使用更低的线mTorr
60mTorr）将提供更均匀的对流传热。然而，许多PCR试剂的塌陷温度非常低，因此冻干过程中设置较高的压力可能并不总是可行的。可以在配方中添加赋形剂，提高塌陷温度，以允许更高的压力设置。这样做的其他好处包括使配方更容易转移到别的可能无法实现非常低真空设置的冻干机（减少工艺放大的风险），以及减少阻塞流现象发生的概率。出于信号校准的目的，诊断试剂盒通常包含不含目标DNA/RNA
DNA/RNA的阳性对照混合物。除了包含测试样品的混合物之外，还分析对照样品，并比较荧光信号以确定患者样品是阳性还是阴性。处理阳性对照样品的一个问题是冻干机内部存在交叉污染的高风险。因此建议客户分别使用多个冻干机，阳性对照始终在同一设备中进行处理。
PCR试剂源材料的冷冻干燥除了延长保质期和避免对供应冷链的需求外，实验室使用冻干PCR
●更稳健的工艺，更高的可靠性和更少的批次变化，因为冷冻干燥大幅度的降低了实验室工作台移液错误和污染的可能性；
PCR微珠在冻干之前使用液氮预冻试剂存在权衡取舍。极快的冷冻速度可*限度地减少冷冻浓度效应，例如
PCR的小样本量能够更好的降低这方面的影响，但需要冻干机提供更冷的搁板温度和更低的真空度来防止珠子在初级干燥过程中熔化。此外，珠子一定要保持冷冻。能够正常的使用冷藏的冷盘来辅助。冷冻干燥机搁板也需要预冷，以避免产品在抽真空之前熔化。要注意的是在产品室门在真空下密封之前，预冷冻搁板会导致环境条件下结霜。
上海莱奥德创生物科技有限公司由德祥科技有限公司创办，专注于提供先进的冻干设备应用和制剂开发相关服务。
/商业化等各方面拥有丰富的经验，迄今为止已为500+客户提供冻干设备及相关服务。客户产品类型涵盖：蛋白、抗体、ADC、疫苗、核酸、多肽、脂质体、IVD、食品等领域。依托与合作伙伴美国SP Scientific和英国Biopharma Group的紧密合作，掌握领先的冻干理念与技术，使用独家先进的冻干设备和软件致力于促进中国生物医药技术创新升级，助力中国大健康行业的持续发展。
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冷库区域位置的重要性
